ED-L2-LMPl-EGFP融合基因慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 丁彦青 张庆玲 杨玉芳
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: EB病毒 EB病毒潜伏膜蛋白1 慢病毒 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 361-363
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2296字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2007.03.008

摘要

目的 构建及鏊定EB病毒LMPl基因和增强型绿色荧光蛋白基因融合慢病毒表达载体.方法 应用DNA重组技术,将EB病毒ED-L2启动子和LMP1基因克隆到带有EGFP基因的FUGW慢病毒表达载体上,筛选阳性克隆,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组载体后,以脂质体介导法将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV△8.9、包膜基因VSVG和带目的 基因ED-L2-LMP1-EGFP载体共同转染到293FT包装细胞内包装病毒,荧光显微镜下观察包装细胞报告基因表达情况,收集病毒上清、浓缩鉴定、测定重组病毒的滴度.PCR和免疫组化鉴定LMP1表达.结果 融合慢病毒表达载体质粒限制性酶切分析证实有782 bp的ED-L2和1 300 bp的LMP1基因片段基因片段插入到慢病毒栽体中.转染重组ED-L2-LMP1-EGFP慢病毒融合载体的细胞于荧光显微镜下呈绿色荧光;对该细胞PCR可以扩增出404 bp大小的LMP1基因片段和370 bp的EGFP基因片断;免疫组化证明LMP1蛋白在转染细胞表达阳性.结论 成功构建了ED-L2-LMP1-EGFP基因的慢病毒表达载体,为进一步在体研究LMP1基因的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨玉芳	解军第458医院眼科	1	0	0.0	0.0