干扰素-α转染HepG2细胞内下调表达基因的筛选

• 作者: 刘妍 孙自勤 张修礼 徐东平 曲建慧 李兆申 钟彦伟
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 干扰素-α 细胞系,肿瘤 抑制性消减杂交技术
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 35-38
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3834字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2007.01.011

摘要

目的 筛选干扰素-α真核表达质粒转染HepG2细胞后细胞内表达下调的基因,以进一步探讨干扰素-α作用的分子生物学机制.方法 将pcDNA3.1(-)-IFN-α以及pcDNA3.1(-)空载体分别转染肝母细胞瘤HepG2细胞系,用抑制性消减杂交技术筛选pcDNA3.1(-)-IFN-α转染HepG2细胞内表达下调的基因.以pcDNA3.1(-)转染组细胞作为tester,pcDNA3.1(-)-IFN-α转染组作为driver,建立消减文库,随机挑选阳性克隆,测序并进行序列比对,得到下调表达的基因.应用RT-PCR技术,进一步证明IFN-α对Hsp90的下调表达作用关系.结果 成功构建了IFN-α真核表达质粒转染HepG2细胞后表达下调的cDNA消减文库.从文库中随机挑选克隆,测序并进行生物信息学分析后,得到下调表达的基因有:铁蛋白,热休克蛋白90,S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶1,真核翻译延伸因子1β,信号序列受体β(SSR2),组织因子路径抑制子,RAD23同源物B.RT-PCR进一步表明,IFN-α真核表达质粒转染的HepG2细胞内Hsp90 mRNA表达水平下调.结论 应用SSH技术成功构建了pcDNA3.1(-)-IFN-α转染的HepG2细胞内表达下调的cDNA消减文库,并筛选出下调表达基因,半定量RT-PCR表明IFN-α对Hsp90 mRNA具有下调表达作用.为进一步阐明IFN-α作用的分子生物学机制提供了重要的理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李兆申	第二军医大学附属长海医院消化内科	1030	7581	34.0	55.0
2	刘妍	解放军第302医院基因治疗研究室	62	535	12.0	21.0
3	徐东平	解放军第302医院基因治疗研究室	43	350	10.0	17.0
4	钟彦伟	解放军第302医院基因治疗研究室	33	327	9.0	17.0
5	曲建慧	解放军第302医院基因治疗研究室	15	63	4.0	7.0