siRNA-LEDGFp52真核表达载体的构建和鉴定

• 作者: 王一 赵海生
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 晶状体来源的上皮生长因子p52 RNA干扰 真核表达载体 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 184-187
• 页数: 4页
• 分类号: R776
• 字数: 3530字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2007.03.007

摘要

目的 构建晶状体来源的上皮生长因子p52(lens epithelium derived growth factor p52,LEDGFp52)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以LEDGFp52为靶基因,以pGensil-1质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的LEDGFp52基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计2条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGensil-1中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.结果 经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体构建成功,重组质粒转染HeLa细胞48 h,Western blotting检测到LEDGFp52蛋白表达的改变.结论 利用RNAi技术可成功构建抑制LEDGFp52表达的小干扰RNA重组体.