一种新的重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-mAFP的构建

• 作者: 匡志鹏 吴继宁 梁安民 罗小玲 谢裕安
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: pAdBM5-GFP 小鼠甲胎蛋白 重组腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 274-276,318
• 页数: 4页
• 分类号: R730.59
• 字数: 2722字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2007.04.012

摘要

目的 构建表达小鼠甲胎蛋白(murine alpha fetoprotein,mAFP)基因的重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-mAFP,并测定其滴度.方法 从Hepa1-6小鼠肝癌细胞中提取总RNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增mAFP基因,测序确认后,插入到pAdBM5-GFP穿梭载体中,双酶切鉴定重组腺病毒载体.线性化重组腺病毒载体与病毒骨架DNA质粒用磷酸钙共沉淀法共转染HEK293A细胞,通过同源重组使腺病毒表达mAFP基因,并在HEK293A细胞中大量扩增含目的基因的重组腺病毒,用TCID50法测定重组腺病毒滴度.结果 成功克隆了小鼠mAFP基因,构建出表达mAFP基因的重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-mAFP,获得了表达mAFP基因的重组腺病毒,病毒滴度达3.2×108PFU/ml.结论 本研究成功构建了pAdBM5-GFP-mAFP载体,获得了高滴度表达mAFP基因的重组腺病毒,为进一步开展肝癌的免疫基因治疗奠定了基础.