溶氧反馈-补料分批技术高密度培养基因重组MAGE1/HSP70/MAGE3工程菌

• 作者: 司少艳 张秀敏 李侠 温江田 王孝功 胡沛臻 葛伟 路凡 隋延仿 黄杨
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑色素瘤抗原 重组 大肠杆菌 发酵
• 年，卷（期）: 2007,（16）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1576-1579
• 页数: 4页
• 分类号: Q784|Q93-335|Q939.121
• 字数: 4998字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2007.16.009

摘要

目的 建立人黑色素瘤抗原MAGE1/HSP70/MAGE3融合蛋白基因重组工程菌E.coli.BL21/pET-MHM的高密度发酵工艺.方法 以摇瓶发酵结果为基础,扩大至NBS Bioflo Ⅳ 20 L发酵罐发酵,利用溶氧反馈-补料分批培养技术,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如发酵培养基、活化时间、诱导浓度及时间、pH值及分批补加营养物质等进行优化.结果 保持培养过程中40%的溶解氧,采用半合成培养基、活化至对数生长期时0.2 mmol/L IPTG诱导5 h以及以甘油为碳源连续流加补料的条件发酵,连续3批重复发酵,最终菌密度D(600)均达45～50时,菌体量可提高至70 g/L以上,目的蛋白的表达量占菌体蛋白总量的38%以上.结论 确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺.