携带Notch-1受体胞内段基因重组腺病毒载体的构建及其在胰腺腺泡细胞中的表达

• 作者: 万赤丹 刘涛 张景辉 张维康 杨明 殷涛 王春友
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒 腺泡细胞 胰腺 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 939-941
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2791字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1001-9030.2007.08.015

摘要

目的 构建并鉴定携带Notch-1受体胞内段基因(NICD)的腺病毒表达载体,同时观察重组腺病毒在胰腺腺泡细胞中的表达.方法 提取K562细胞总RNA,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NICD并将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,经Pme Ⅰ酶切线性化质粒后与pAdeasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中同源重组.将鉴定正确的同源重组质粒线性化后转染293细胞进行包装、扩增得到重组腺病毒颗粒Ad-NICD.将该病毒感染胰腺腺泡细胞并通过实时定量PCR检测其表达.结果 经PCR、基因测序和酶切鉴定证实重组质粒pAd-NICD构建成功,将重组质粒导入293细胞可以观察到绿色荧光蛋白(GFP)的表达,实时定量PCR证实病毒颗粒Ad-NICD感染腺泡细胞后可以有效地增加NICD表达.结论 成功构建Ad-NICD并证实其在腺泡细胞中的表达,为进一步研究Notch信号传导途径及其与胰腺的疾病的关系奠定了基础.