结肠特异性基因RELMβ的克隆及其真核表达载体构建

• 作者: 吕清 杨秀萍 童强松 董继华 郑丽端
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RELMβ基因 组织特异性 结肠 基因表达 免疫印迹 逆转录聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2007,（21）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2284-2289
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4295字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2007.21.003

摘要

目的:观察克隆小鼠结肠特异性基因RELMβ,并构建其真核表达载体.方法:采用Western blot、Northern blot方法检测RELMβ基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠结肠组织中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增RELMβ全长cDNA,克隆至T载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点EcoR Ⅰ;重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染小鼠胚胎纤维母细胞NIH/3T3、结肠癌细胞系CT26,Western blot及RT-PCR法检测细胞RELMβ表达水平.结果:RELMβ mRNA和蛋白特异表达于小鼠结肠,而其他脏器未见表达.成功克隆了小鼠RELMβ全长cDNA(318 bp),与已报道序列的同源性高达99%,获得GenBank登录号DQ157777.真核表达载体pcDNA3.1-RELMβ转染细胞后,细胞内RELMβ mRNA和蛋白水平均显著增高(P＜0.01).结论:从小鼠结肠组织中克隆出RELMβ特异性表达基因,为深入研究RELMβ基因的生物学作用及其在结肠疾病靶向治疗中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	童强松	华中科技大学同济医学院附属协和医院外科	55	401	11.0	17.0
2	董继华	华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室	70	396	11.0	16.0
3	郑丽端	华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科	47	335	10.0	17.0
4	吕清	华中科技大学同济医学院附属协和医院外科	98	435	11.0	15.0
5	杨秀萍	华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科	33	204	7.0	13.0