靶向COX-2基因短发夹RNA重组表达载体的构建及鉴定

• 作者: 刘预 张钰倩 杨义明 涂植光
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 环氧化酶-2 短发夹RNA 重组表达载体
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 503-506
• 页数: 4页
• 分类号: Q554.6|Q782|Q785
• 字数: 3464字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2007.06.010

摘要

目的 利用RNA干扰技术,以COX-2为靶基因,构建靶向COX-2基因的短发夹RNA(shRNA)重组表达质粒并进行鉴定分析.方法 设计、合成1对COX-2编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,经退火形成互补双链,通过定向克隆至质粒pGenesil-1,构建shRNA真核表达载体.转化JM109大肠杆菌,提取质粒进行酶切鉴定和测序分析;RT-PCR和Western blot检测重组表达质粒对COX-2 mRNA和蛋白表达的抑制效果.结果 酶切证实目的DNA定向克隆至载体上,测序分析结果与目的序列相同.RT-PCR和Western blot结果显示,与未转染组比较,pshRNA-COX-2重组表达质粒对β-actin基因无明显影响,而对COX-2有明显抑制作用.COX-2 mRNA和蛋白表达的抑制率分别为66.9%和50.3%.结论 成功构建的靶向干扰COX-2基因重组质粒能够显著抑制COX-2基因表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	涂植光	重庆医科大学医学检验系临床生物化学教研室	172	1533	19.0	32.0
2	刘预	重庆市肿瘤医院临床检验中心	36	317	10.0	17.0
3	杨义明	重庆医科大学医学检验系临床生物化学教研室	10	77	5.0	8.0
4	张钰倩	南京大学生命科学院生物化学系	2	2	1.0	1.0