RNAi表达载体干扰四型肽精氨酸脱亚氨基酶基因在HL-60细胞系中的表达

• 作者: 卢天宝 吕红根 宗明 张慧 杨蔺 范列英
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PADI-4基因 SiRNA RNA干扰 HL-60细胞系
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 972-975
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3318字
• 语种: 中文

摘要

目的:设计针对PADI-4基因的RNAi表达载体,抑制PADI-4基因在HL-60细胞中的表达,初步确定PADI-4基因在类风湿性关节炎发生发展中的作用,为后续研究奠定实验基础.方法:设计并合成4对针对PADI-4基因编码区的核苷酸链,核苷酸链经体外退火后形成双链SiRNA,克隆进入pSiRNA-hH1neo G2空载体后转化入GT116细胞,通过蓝白斑筛选后,挑取白斑进行扩增,抽提质粒并对重组质粒进行双酶切分析.以脂质体转染法,分别将pSiRNA-hH1neo G2空载体和4个重组质粒载体转染进入HL-60细胞系,于转染的第3、5、7、10、14天后收集细胞,抽提细胞总RNA后,反转录成cDNA,用Real-time PCR技术检测各实验组HL-60细胞内PADI-4基因mRNA水平的表达情况,并做统计分析.结果:经Acc 65Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切鉴定,重组质粒中已经插入目的片段,为合格质粒;转染pSiRNA表达载体后,HL-60细胞系中PADI-4基因mRNA表达水平下降,其中以第3号载体的干扰效果最优,干扰效率达到62%.结论:成功构建针对PADI-4基因的pSiRNA表达载体,并且筛选出干扰效率最好的载体,为后续研究PADI-4基因在类风湿性关节炎中的作用奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张慧	上海同济大学附属东方医院检验科	2	14	2.0	2.0
2	范列英	上海同济大学附属东方医院检验科	2	12	2.0	2.0
3	卢天宝	上海同济大学附属东方医院检验科	1	2	1.0	1.0
4	宗明	上海同济大学附属东方医院检验科	1	2	1.0	1.0
5	吕红根	上海同济大学附属东方医院检验科	1	2	1.0	1.0
6	杨蔺	上海同济大学附属东方医院检验科	1	2	1.0	1.0