人生存素基因的克隆、表达与抗血清制备

• 作者: 张仁刚 敬保迁 杨健
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: 生存素 抗血清 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 240-243
• 页数: 4页
• 分类号: R730.4
• 字数: 3714字
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆表达重组人生存素,制备其抗血清并检测其免疫识别活性.方法 用RT-PCR方法从培养的人白血病细胞株HL-60中克隆人生存素cDNA,克隆到原核表达载体pET32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,目的蛋白经Ni-NTA树脂亲和纯化后免疫小鼠制备抗血清,ELISA检测抗血清的效价,Western blot和免疫细胞化学法鉴定抗血清的特异性.结果 所克隆生存素cDNA序列与Genbank中序列完全一致,将其读码框插入原核表达载体pET32a(+)诱导表达后,SDS-PAGE电泳分析证实重组蛋白为分子量约37KD的融合蛋白,表达量占总茵体的30%,纯化后融合蛋白的纯度为95%,所制备的鼠抗血清的效价达1:1 600,Westem blotting证实其有较好的特异性,可以检测肿瘤细胞生存素的表达.结论 我们已克隆并表达了人生存素基因,所制备的抗人生存素血清可用于相关肿瘤检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨健	川北医学院免疫学与分子生物学研究所	46	93	5.0	7.0
2	张仁刚	川北医学院免疫学与分子生物学研究所	20	56	5.0	6.0
3	敬保迁	川北医学院免疫学与分子生物学研究所	46	116	5.0	8.0