人生存素survivin的克隆与分泌表达

• 作者: 代晓华 周圆 姜琳琳 朱惠芳 熊冬生 程昕 纪庆
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 生物医学工程 生存素 分泌表达 大肠杆菌 凋亡
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 89-92
• 分类号: R346
• 字数: 3487字
• 语种: 中文

摘要

旨在克隆人生存素( survivin)基因,并在原核系统中进行可溶性表达.采用RT-PCR方法从人乳腺癌细胞MCF-7中克隆survivin基因,将其重组到pAYZ表达栽体中,构建带有六聚组氨酸纯化标记的人survivin基因原核表达栽体pAYZ-survivin,将该载体转化大肠杆菌16C9进行表达.结果表明,成功克隆了survivin基因并构建了重组表达载体.融合蛋白主要以可溶性状态分泌到周质腔内存在.分离提取蛋白,HiTrap金属螯合柱进行亲和层析纯化,并经Western blot验证了高纯度survivin融合蛋白的表达.