淡紫拟青霉丝氨酸蛋白酶基因克隆表达及抗血清的制备

• 作者: 宋力 蒋桂芳 黄俊生
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 淡紫拟青霉菌 PL基因 原核表达 抗血清 ELISA
• 年，卷（期）: 2008,（25）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 10783-10784,10814
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 2014字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2008.25.026

摘要

[目的]探索利用大肠杆菌进行丝氨酸蛋白酶PL基因的克隆与表达及抗血清制备的方法.[方法]根据报道的PL蛋白基因序列设计1对引物,通过RT-PCR扩增获得PL基因片段,对重组载体进行构建、鉴定和序列分析,用表达的特异蛋白条带制备抗原,免疫家兔制备抗血清.[结果]通过RT-PCR扩增得到长约850 bp的PL基因片段,将其克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,获得的重组子pET-22b-PL转化E.coli B121(DE3),经最终浓度为1 mmol/L IPTC诱导37℃培养4 h,获得约31 kDa大小的重组蛋白.sDs_PAGE电泳分析表明,该蛋白表达量占菌体总蛋白的60%,说明该蛋白得到了高效表达.用表达的特异蛋白条带制备的免疫家兔制备抗血清,经ELISA测定效价为1/10 000.[结论]通过基因重组可获得PL基因在大肠杆菌中的高效表达蛋白,且该蛋白具有较高的免疫活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄俊生	中国热带农业科学院环境与植物保护研究所	88	1074	18.0	28.0
2	宋力	重庆文理学院生物化学与环境科学系	23	264	9.0	16.0
3	蒋桂芳	重庆文理学院生命科学系	14	41	4.0	6.0