野生型PTEN基因重组腺病毒表达载体构建的改进及其鉴定

• 作者: 周克元 李树梅 林观平 熊亮
• 来源期刊: 广东医科大学学报
• 关键词: 重组腺病毒 PTEN 基因治疗
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 115-119
• 页数: 5页
• 分类号: R73.37
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2008.02.001

摘要

目的 为改进构建野生型抑癌基因PTEN重组腺病毒表达载体的方法.方法 用抑癌基因PTEN与带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV重组后转化含腺病毒骨架载体pAd Easy1的E.coli BJ5183(Ad-1 cells),以获得重组腺病毒质粒,经限制酶PacⅠ线性化后 ,转染293细胞, 检测PTEN蛋白的表达,并以Ad-PTEN感染人乳腺癌MCF-7细胞后, 测其感染率.结果 获得PTEN基因的重组腺病毒表达载体(Ad-PTEN),受Ad-P TEN转染的293细胞发生肿胀或圆缩的形态改变,经PCR对传代的Ad-PTEN分析证实得到目的基因PTEN,荧光显微镜下能观察到293细胞内有绿色荧光.通过Western blot可检测到293细 胞中PTEN蛋白高效表达.Ad-PTEN感染的人乳腺癌MCF-7细胞, 感染率达80%～90%.结论 PTEN重组腺病毒表达载体可在细菌体内进行同源重组而构建,方法较简便、快速,且生成的病毒滴度高、感染率高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	熊亮	赣南医学院预防医学教研室	20	58	5.0	7.0
2	李树梅	四川省攀枝花市十九冶医院妇产科	3	0	0.0	0.0