猪FMDV受体整联蛋白β1亚基LBD多克隆抗体的制备和初步应用

• 作者: 宋帅 常惠芸 独军政 王景锋 谢庆阁 高闪电
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 口蹄疫病毒 受体 整联蛋白β1亚基 配体结合域 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 999-1001,1005
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2816字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.11.002

摘要

目的 表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β1亚基配体结合域β1LBD,制备兔抗β1LBD多克隆抗体检测β1p CHOK1细胞β1亚基的表达.方法 利用PCR方法 扩增整联蛋白β1LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后与pGEX-4T-1原核表达载体相连,构建的 pGEX-β1LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的 蛋白.然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA和Western-blot方法 分别鉴定抗体的效价和特异性,并用制备的抗体以间接免疫荧光抗体法对β1p CHOK1细胞中β1亚基的表达进行检测.结果 SDS-PAGE电泳分析显示阳性菌经诱导后表达一Mr 约为42 000的GST-β1LBD融合蛋白,与预期结果 相符.目的 蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β1LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1:12 800以上,具有较高的特异性,间接免疫荧光显示β1p-CHOK1细胞β1亚基表达于其细胞表面.结论 制备了具有高亲和性和特异性的兔抗猪源整联蛋白β1LBD多克隆抗体,为深入研究猪源整联蛋白β1在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础.