猪膜联蛋白A2多克隆抗体的制备、亲和纯化与鉴定

• 作者: 刘湘涛 刘艳红 吉艳红 尚佑军 王光祥 陈江涛
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪膜联蛋白A2 多克隆抗体 亲和纯化
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 1502-1509
• 分类号: S852.23
• 字数: 6176字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在制备并亲和纯化兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体.通过PCR从质粒pA2-EGFP中将编码猪膜联蛋白A2与增强型绿色荧光蛋白融合基因(Annex A2-EGFP)亚克隆到pET-30a(+),构建了原核表达质粒p30a/AE,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导以包涵体形式表达了猪ANNXA2-EGFP融合蛋白,用Ni-Resin HP树脂对表达的目的蛋白进行亲和纯化.用纯化的ANNXA2-EGFP融合蛋白免疫兔,制备兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体.将以前纯化的猪可溶性GST-ANNXA2融合蛋白偶联NHS活化琼脂糖凝胶FF,亲和纯化多克隆抗体.用GST-ANNXA2亲和纯化的多抗效价达到1:12800,Western blot和免疫组化结果证实具有高特异性.制备的高效价和高特异性兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体,为进一步研究膜联蛋白A2在病毒感染中的作用奠定了基础.