猪P58IPK蛋白多克隆抗体的制备

• 作者: 卓严玲 吕其壮 张柱青 梁小妹 梁小梅 覃婷 邓家华
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪P58IPK蛋白 原核表达与纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 2083-2090
• 页数: 8页
• 分类号: S852.65+9.2|Q785
• 字数: 5875字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.011.019

摘要

P58IPK(58 kD inhibitor of PKR)作为宿主细胞分子伴侣蛋白,在调节机体抗病毒反应和免疫应答方面发挥着重要作用.本研究拟克隆猪(Sus scrofa)P58IPK基因CDS序列并构建其原核表达载体,纯化P58IPK蛋白并以此为抗原制备多克隆抗体,以期为后续研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)与宿主之间的互作关系提供基础材料.根据猪P58IPK全基因序列(GenBank No.HQ287801.1)设计引物,以反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法扩增P58IPK基因CDS序列(去除信号肽序列),经NdeⅠ/XbaⅠ 双酶切后定向克隆至原核表达载体pCzn1;将其转化Arctic-ExpressTM大肠杆菌(Escherichia coli)进行诱导表达;表达产物经变性、复性及His-Band Ni+层析柱亲和纯化,将纯化产物His-P58IPK重组蛋白作为抗原免疫兔子(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体.抗体纯化后,分别利用间接ELISA和Western blot方法对其效价和特异性进行检测.结果显示,克隆所得的猪P58IPK基因CDS序列长度为1425 bp,表达产物His-P58IPK重组蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为54.44 kD;由此蛋白制备的多抗效价在1:512000以上,能够特异性识别目标蛋白(包括重组蛋白His-P58IPK和猪P58IPK蛋白).本研究成功克隆了猪P58IPK多克隆抗体,可为深入研究猪P58IPK蛋白功能和PCV2病毒与宿主之间的互作机制提供基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕其壮	玉林师范学院生物与制药学院	11	13	2.0	3.0
5	卓严玲	玉林师范学院生物与制药学院	5	5	2.0	2.0
6	邓家华	玉林师范学院生物与制药学院	3	1	1.0	1.0
7	梁小梅	玉林师范学院生物与制药学院	1	1	1.0	1.0
8	梁小妹	玉林师范学院生物与制药学院	1	1	1.0	1.0
9	覃婷	玉林师范学院生物与制药学院	1	1	1.0	1.0
10	张柱青	玉林师范学院生物与制药学院	2	3	1.0	1.0