小鼠肝炎病毒N基因的原核表达和免疫活性初步分析

• 作者: 周艳 王宗耀 胡建华 高诚
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠肝炎病毒 N基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 265-269
• 页数: 5页
• 分类号: R373.21
• 字数: 4245字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2008.04.007

摘要

目的 对小鼠肝炎病毒(mouse hapetitis virus)A59毒株核蛋白(N)基因进行了克隆、表达和重组蛋白的免疫活性分析.方法 根据GenBank公布的MHV-A59 N基因序列(AY700211),设计了一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出N基因的主要抗原片段NS,将目的片段纯化后与pGEM-T-easy载体连接得到重组质粒pTN,双酶切回收目的基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组质粒pGEX-Ns,转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行了诱导表达.对表达裂解物进行SDS-PAGE和Western-blotting 验证.结果 表达产物相对分子质量约56×103与预期相符;能与MHV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带.结论 原核表达的NP(S)蛋白有良好的抗原性,为检测小鼠肝炎病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础.