牛冠状病毒N基因的原核表达及初步应用

• 作者: 余丽芸 侯喜林 刘双翼 刘合义 周玉龙 孙留霞 朴范泽 王进轶
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛冠状病毒 N基因 克隆 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 76-80
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3486字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.01.019

摘要

目的 获得牛冠状病毒N基因的全长序列,实现N基因在大肠杆菌中的高效表达,并进行初步应用.方法 根据已发表的牛冠状病毒Mebus株的序列设计引物,对BCV-DQ株进行RT-PCR扩增、克隆和测序;将该基因插入到原核表达载体pET-30a (+)上进行原核表达,SDS-PAGE 和Western blot检测;用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,对部分临床样本进行检测.结果 BCV-DQ株N基因全长1 347bp,与GenBank已发表的6株BCV的N基因相比较,核苷酸同源性98.3%以上.构建的重组质粒pET-N能表达出一条大小约为60 ku的蛋白,且能与鼠抗BCV血清发生特异性反应.用建立的ELISA方法对黑龙江不同地区送检的共256份牛血清样品进行检测,结果阳性率65.23%,与病毒中和试验的符合率达95.31%.结论 BCV N基因保守性很高,并在原核表达系统中获得了高效表达,其表达产物具有良好的免疫反应原性.临床检测结果表明N蛋白可作为诊断抗原用于牛冠状病毒病的流行病学调查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余丽芸	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	126	465	10.0	16.0
2	侯喜林	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	115	607	13.0	19.0
3	周玉龙	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	64	267	8.0	13.0
4	孙留霞	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	4	4	2.0	2.0
5	刘双翼	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	7	29	3.0	5.0
6	王进轶	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	5	12	2.0	3.0
7	刘合义	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	6	29	3.0	5.0