鱼类神经坏死病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用

• 作者: 刘宗晓 刘荭 吕建强 李惠芳 王侃 田飞焱 罗卫 范万红 陈焕春
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鱼类神经坏死病毒 实时荧光RT-PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 506-510
• 页数: 5页
• 分类号: S941
• 字数: 4127字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1005-8737.2008.03.019

摘要

根据GenBank中登录的鱼类神经坏死病毒CP基因序列,选择高度保守区域设计引物和TaqMan荧光探针,通过对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化,建立了用于检测鱼类神经坏死病毒的实时荧光RT-PCR方法.利用该方法检测鱼类神经坏死病毒及其他多种常见的水生动物RNA病毒,结果只能检测到目的病毒,表明其具有良好的特异性.灵敏性试验发现,其最低检测限可达1.2 pg/gL,的总RNA.与RT-PCR的灵敏度对比试验表明,其敏感度比RT-PCR高100倍.对同一样品进行检测,在组内及组间的变异系数分别为0.9%以及1.5%,证实其重复性极好,并且从抽提核酸到得出结果仅需4h.对临床500份样品进行鱼类神经坏死病毒检测,结果发现有40份阳性样品.这些结果表明,本研究所建立的实时荧光RT-PCR能对鱼类神经坏死病毒进行准确、快速的检测,具有特异性好、灵敏度高的优点,是开展鱼类神经坏死病的临床检测和疫情监测工作的有力工具.[中国水产科学,2008,15(3):506-510]