原核表达、稀释复性的人FcγR Ⅱ a恢复IgG的结合功能

• 作者: 乔松林 何礼洋 席俊 张利娜 张改平 张红 游雷鸣 苗现伟 郑彦君
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: shuRⅡ蛋白 原核表达 复性
• 年，卷（期）: 2008,（12）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 1059-1063
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4927字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5101.2008.12.001

摘要

目的 探讨原核表达稀释复性的可溶性人FcγR Ⅱ a(shuFcγRⅡa)的胞外区蛋白在体外与配体的结合活性.方法 应用PCR技术从重组质粒pc3huR Ⅱ中扩增huFcγR Ⅱ a的胞外区基因,将其克隆于原核表达载体pET-28a中.所构建的重组质粒经PCR和酶切鉴定后转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达,制备融合蛋白包涵体.并采用多次洗涤法分离和纯化包涵体,用稀释法对纯化后的目的 蛋白进行复性,ELISA和流式细胞术测定重组shuRⅡ在体外与配体的结合活性.结果 扩增到了huFcγRⅡa的胞外区基因,所构建的pETshuRⅡ重组质粒经PCR和酶切鉴定与设计序列一致.转化BL21(DE3)后,IPTG诱导目的 蛋白表达率约为30%.SDS-PAGE初步测定目的 蛋白的相对分子质量(Mr)约为24.8×103,与理论预期值一致.破菌后电泳证实目的 蛋白主要以包涵体形式表达,经多次洗涤后蛋白纯度大于90%.ELISA法测得重组shuRⅡ与人IgG在体外有良好的结合活性,流式细胞术测得重组shuRⅡ对配体与受体结合有抑制作用.结论 本复性方法可得到和天然蛋白类似生物学活性的目的 蛋白.