人SNCA基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达

• 作者: 刘康永 刘春风 杨亚萍 程言博 钱进军
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: α-synuclein(SNCA) 致病突变 真核表达载体pEGFP-C3 稳定转染 PC12细胞
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 23-26
• 页数: 4页
• 分类号: R742.5|Q78
• 字数: 3165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2008.01.008

摘要

目的:构建含人野生型及致病突变A30P、A53TSNCA基因的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并通过稳定转染获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein(SNCA)的单克隆PC12细胞株.方法:通过RT-PCR方法扩增SNCA基因,T-A克隆后测序.在此基础上利用单核苷酸差异引物定点诱变法相继构建含SNCA基因编码区EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ两酶切位点的同义突变及其致病突变G88C(Ala30Pro)、G209A(Ala53Thr)的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并以PCR、双酶切、测序鉴定.以重组质粒pEGFP-C3-SNCA通过脂质体转染方法转染PC12细胞;以G418进行筛选;以有限稀释法进行亚克隆获得稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株,并以稳定转染pEGFP-C3的PC12细胞作为对照组细胞,通过RT-PCR、Western blot及荧光显微镜鉴定各单克隆PC12细胞株.结果:PCR、酶切及测序证明重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA构建成功.RT-PCR、Western blot及荧光显微镜确认目的基因序列在PC12细胞稳定过表达.结论:成功地构建SNCA基因WT及A30P与A53T突变型的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA;成功获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘春风	苏州大学附属第二医院神经内科	349	3050	25.0	34.0
5	杨亚萍	苏州大学附属第二医院神经内科	19	152	7.0	11.0
9	钱进军	苏州大学附属第二医院神经内科	15	129	6.0	11.0
11	刘康永	苏州大学附属第二医院神经内科	10	85	4.0	9.0
12	程言博	苏州大学附属第二医院神经内科	11	75	5.0	8.0