杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白基因的克隆及原核表达

• 作者: 冯英才 刘兰琦 刘红涛 王天云 王鹏举 薛乐勋
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 杜氏盐藻 核基质附着区 核基质附着区结合蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1120-1123
• 页数: 4页
• 分类号: Q781
• 字数: 3520字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2008.06.014

摘要

目的:构建杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白.方法:根据GenBank上杜氏盐藻MAR结合蛋白的cDNA全长序列设计出含有特定酶切位点的引物,PCR法获得MAR结合蛋白基因序列全长,将其克隆至载体pMD18-T中.酶切连接到pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-MBP,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,Western blotting检验其表达结果.结果:重组质粒经酶切、PCR、测序鉴定,成功构建了原核表达载体pET-MBP,对表达的融合蛋白的Western blotting分析结果表明表达的蛋白质为目的蛋白.Ni2+亲和层析法纯化蛋白质,纯化后目的蛋白在总蛋白中的含量约为70%.结论:成功地克隆杜氏盐藻MAR结合蛋白基因的全长并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,且纯化了MAR结合蛋白的融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王天云	新乡医学院生物化学与分子生物学教研室	76	498	10.0	20.0
2	薛乐勋	郑州大学生物工程系细胞生物学研究室	140	1187	18.0	26.0
3	刘红涛	郑州大学生物工程系细胞生物学研究室	60	431	11.0	18.0
4	王鹏举	郑州大学生物工程系细胞生物学研究室	10	14	2.0	3.0
5	刘兰琦	郑州大学生物工程系细胞生物学研究室	4	15	2.0	3.0
6	冯英才	郑州大学生物工程系细胞生物学研究室	3	5	1.0	2.0