山羊精子电穿孔转染外源DNA影响因素及最适条件的研究

• 作者: 孙新明 魏泓
• 来源期刊: 井冈山学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 精子介导 基因转移 电穿孔 山羊
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 67-71
• 页数: 5页
• 分类号: Q781
• 字数: 4798字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8085.2008.01.023

摘要

本文以山羊精子为材料用电穿孔导入法转染外源基因,为生产转基因山羊奠定基础.用血细胞计数器在显微镜下记数死亡精子数检测精子活力,并用原位杂交实验检测电击精子消化前、后阳性率.以探讨山羊精子电穿孔转染外源DNA的方法及影响因素,摸索并优化电穿孔转染程序和条件.结果显示:电穿孔导入法可用于山羊精子介导转染外源DNA;电场强度、电击时间和电击次数同时影响精子活力,其中电击时间显著影响外源DNA的内化转运(P＜0.05),山羊精子最适电穿孔条件为400V、200μs、电击1次,该条件下电击后精子活力和消化前、后阳性率分别为0.45和27.6%、22.5%;最适电穿孔条件下电击洗涤精子比未洗涤精子的消化后阳性率提高14%(P＜0.01),将洗涤精子与外源DNA共孵育后再电击比不孵育处理组的消化后阳性率提高5.8%(P＞0.05);电穿孔处理消化后阳性率在个体间无显著差异,且电击转染的精子被内化转运到精细胞内的外源DNA分布不规则.结果表明,山羊精子电穿孔转染外源DNA的最适转染条件为对精子充分离心洗涤并与外源DNA共孵育后.在400V/200μs条件下电击1次.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙新明	井冈山大学医学院解剖教研室	15	38	4.0	5.0