人白细胞介素-10真核表达载体的构建及其在兔滑膜细胞中的表达

• 作者: 于广杰 刘国平 刘相萍 吕振华 杨堃 梁宏达 王吉波 王燕鸣
• 来源期刊: 中华风湿病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素10 真核表达载体 转染 兔 滑膜
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 250-253
• 页数: 4页
• 分类号: R9
• 字数: 3413字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-7480.2008.04.010

摘要

目的 构建人白细胞介素-10(hIL-10)高效真核表达载体,观察其在家兔滑膜细胞(RSCs)中表达.方法 提取人外周血单个核细胞(PBMCs)总RNA作为模板,根据基因库(NM 000572)中hIL-10全长开放读框设计特异性引物,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)一步法扩增hIL-10 mRNA全长开放读框,扩增产物定向克隆人真核表达载体pcDNA4/HisMaxA,并对克隆人真核表达载体的扩增产物进行酶切及DNA测序鉴定,构建的真核表达载体pcDNA4/HisMaxA-hIL-10经阳离子脂质体介导转染兔滑膜细胞RSCs.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测转染后12、24、48、72 h和7、14 d RSCs培养上清中hIL-10水平.结果 RT-PCR产物约0.54 kb,克隆人真核表达载体pcDNA4/HisMaxA的扩增产物经酶切及DNA测序鉴定与读码框架序列无差别.转染后12 h到第7天细胞培养上清检测出hIL-10,且水平显著性高于对照组(F=21.878,P＜0.01).结论 hIL-10真核高效表达载体pcDNA4/HisMaxA-hIL-10构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨堃	青岛大学医学院附属医院分子生物实验室	59	195	8.0	11.0
2	王吉波	青岛大学医学院附属医院风湿免疫科	57	283	9.0	14.0
3	刘相萍	青岛大学医学院附属医院分子生物实验室	61	180	7.0	8.0
4	吕振华	青岛大学医学院附属医院分子生物实验室	33	114	7.0	9.0
5	梁宏达	青岛大学医学院附属医院风湿免疫科	18	105	5.0	10.0
6	王燕鸣	青岛海慈医院检验科	4	15	2.0	3.0
7	刘国平	青岛大学医学院附属医院风湿免疫科	3	4	1.0	2.0
8	于广杰	青岛海慈医院神经外科	1	0	0.0	0.0