产肠毒素D金黄色葡萄球菌的筛选及其基因克隆和蛋白表达

• 作者: 张仁利 甄茵 耿艺介 胡章立 高世同
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌肠毒素D 重组SED蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 23-27
• 页数: 5页
• 分类号: R378.11
• 字数: 3858字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2008.01.008

摘要

目的 克隆金黄色葡萄球菌肠毒素D基因(entD),表达和纯化其重组蛋白(rSED),以进一步制备抗rSED抗体,研制SED金标免疫快速检测试纸条.方法 利用PCR技术,从野生型金黄色葡萄球菌中筛选产肠毒素D金黄色葡萄球菌标准株,扩增entD基因,克隆至pGEM-T Easy载体,亚克隆至原核表达载体pET28a,重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,免疫印迹检测抗原活性.结果 分离获得1株产肠毒素D金黄色葡葡球菌标准株,成功克隆entD序列,测序表明该基因共684 bp,与其他entD序列(GenBank登陆号:M28521)具有99%的同源性.rSED蛋白在大肠杆菌中得到高效的可溶性表达.免疫印迹结果 表明,rSED蛋白能被抗天然SED抗体识别.结论 通过基因重组技术制备的重组SED蛋白具有良好的免疫反应性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	甄茵		1	3	1.0	1.0
5	张仁利		192	798	13.0	17.0
9	耿艺介		105	506	11.0	15.0
10	高世同		137	593	11.0	15.0
11	胡章立	深圳大学生命科学学院	68	500	13.0	18.0