增强绿色荧光蛋白标记比较腺病毒、腺相关病毒体外转染兔软骨细胞的效果

• 作者: 吴小兵 李连华 杨新宇 翁习生 邱贵兴
• 来源期刊: 中华骨科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 软骨细胞 腺病毒科 转染
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 408-412
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4120字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-2352.2008.05.012

摘要

目的 通过增强绿色荧光蛋白(eGFP)标记,比较腺病毒(Ad)、腺相关病毒(AAV)对体外培养软骨细胞的转染效果.方法 体外培养正常3月龄新西兰兔关节软骨细胞,以rAd5-eGFP、rAAV2-eGFP分别转染原代关节软骨细胞,计算最佳传染复数.之后以最佳传染复数的病毒重组体转染软骨细胞,分别应用流式细胞仪检测绘制转染率的时间一反应曲线,倒置荧光显微镜下观察转染后细胞的大体形态、绿色荧光的表达情况并应用荧光定量PCR检测转染前后软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达水平的变化.结果 rAd5-eGFP、rAAV2-eGFP的最佳传染复数分别为1×103 vp/cell和1×105 vg/cell.分别应用最佳传染复数体外转染原代培养的软骨细胞后,rAd5-eGFP在转染后1～2 d荧光表达即可达到高峰,但之后迅速衰减,在转染后第28天基本检测不到荧光表达.rAAV2-eGFP在转染第7天荧光表达达高峰,随之缓慢衰减,在转染后第56天仍可检测到绿色荧光表达.荧光定量PCR检测显示,rAd5-eGFP在转染软骨细胞后,软骨细胞合成Ⅱ型胶原mRNA的水平明显下降,而rAAV2-eGFP则影响不显著.结论 Ad转染体外培养的关节软骨细胞后,目的基因的表达迅速,但维持时间短,对软骨细胞表型的影响较明显;AAV转染软骨细胞后,目的基因的表达缓慢,但维持时间长,且对软骨细胞表型的影响较小.AAV更适于作为软骨细胞的体外转染载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱贵兴	中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院骨科	131	1425	18.0	32.0
2	吴小兵	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室	24	91	5.0	8.0
3	翁习生	中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院骨科	106	1029	17.0	25.0
4	杨新宇	中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院骨科	10	167	5.0	10.0
5	李连华		25	231	8.0	14.0