胰腺癌CFPAC1细胞增殖诱导配体基因shRNA慢病毒表达载体的构建

• 作者: 毛振彪 王峰 邵建国 陈琳
• 来源期刊: 中华胰腺病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 慢病毒属 增殖诱导配体 细胞系,肿瘤
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 88-91
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 1907字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2008.02.006

摘要

目的 构建针对人胰腺癌细胞株CFPAC1增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因的shRNA慢病毒表达载体.方法 应用基因工程技术,筛选出针对APRIL基因的RNAi靶序列,与pGCL-GFP载体连接,构建慢病毒表达载体LV-shAPRIL;将连接产物转化到DHSα感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定.再用LV-shAPRIL、pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒.重组慢病毒感染CFPAC1细胞,实时定量PCR和Western blotting检测CFPAC1细胞APRIL mRNA和蛋白的表达.结果 PCR和测序结果与构建的慢病毒载体的预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为5×107TU/ml.构建的慢病毒载体感染CFPAC1细胞后第4天、第4周和第8周,APRIL mRNA表达量较空载体慢病毒感染组分别下降了73%、70%和71%;APRIL蛋白表达量分别下降了66%、63%和62%(P＜0.05).而各时间段未感染慢病毒的细胞组与空载体组相比无明显差异(P＞0.05).结论 成功构建了APRIL基因的shRNA慢病毒表达载体LV-shAPRIL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王峰	南通大学附属医院检验科	37	96	6.0	7.0
2	陈琳	南通大学附属南通第三医院检验科	30	84	6.0	8.0
3	邵建国	南通大学附属南通第三医院消化内科	33	106	5.0	9.0
4	毛振彪	南通大学附属医院消化内科	52	186	8.0	10.0