核心结合因子(Cbfa1/Runx2)重组腺病毒载体的构建、鉴定及在脂肪来源干细胞中的表达

• 作者: 周春燕 张辛 敖英芳 杨民 林霖 陈苹 马康涛
• 来源期刊: 中国运动医学杂志
• 学科: 体育
• 关键词: 核心结合因子 脂肪组织来源干细胞 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 67-71
• 页数: 5页
• 分类号: G80
• 字数: 4237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6710.2008.01.016

摘要

目的:验证核心结合因子(Cbfa1/Runx2)的重组腺病毒载体可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白.方法:分离、扩增脂肪组织来源干细胞并诱导其向骨细胞、脂肪细胞分化.将Cbfa1/Runx2 cDNA的全长序列亚克隆到穿梭质粒pAdTrack上,在BJ5183细菌内和pAdEasy1同源重组,筛选阳性克隆,命名为Ad-Cb-fa1/Runx2.经酶切、PCR鉴定,线性化后以脂质体法转染293T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测.通过RT-PCR、间接免疫荧光检测Ad-Cbfa1/Runx2感染脂肪组织来源干细胞后Cbfa1/Runx2基因的表达.结果:脂肪组织来源干细胞细胞数目两天增长一倍.在特定诱导条件下,可向成脂细胞、成骨细胞分化.酶切及PCR鉴定证实Cbfa1/Runx2基因重组腺病毒载体构建成功.Ad-Cbfa1/Runx2对脂肪组织来源干细胞的转染效率为81.39%.转染3天后,PCR、间接免疫荧光检测到脂肪组织来源干细胞中Cbfa1/Runx2蛋白的表达.结论:成功分离、培养了脂肪组织来源干细胞,构建了含有小鼠Cbfa1/Runx2基因的重组腺病毒载体,证明了Ad-Cbfa1/Runx可高效感染脂肪组织来源干细胞并表达Cbfa1/Runx2蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	敖英芳	北京大学第三医院运动医学研究所	225	2217	25.0	33.0
2	林霖	北京大学第三医院运动医学研究所	17	150	5.0	12.0
3	张辛	北京大学第三医院运动医学研究所	23	83	5.0	7.0
4	杨民	皖南医学院弋矶山医院骨科	62	305	9.0	14.0
5	陈苹	北京大学医学部生物化学与分子生物学系	10	19	3.0	4.0
6	马康涛	北京大学医学部生物化学与分子生物学系	23	90	6.0	8.0
7	周春燕	北京大学医学部生物化学与分子生物学系	52	259	8.0	14.0