核心结合因子α1过表达慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 曹金芳 李伟宏 王惠宁 邓辉
• 来源期刊: 中国现代医生
• 学科: 医学
• 关键词: CBFα1/RUNX2 慢病毒载体 转染
• 年，卷（期）: 2010,（33）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 7-9,21,封3
• 分类号: R373
• 字数: 3697字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-9701.2010.33.003

摘要

目的 构建含人CBF α 1/RUNX2基因的过表达慢病毒载体.方法 采用PCR技术体外扩增人CBF α 1/RUNX2,将扩增产物与慢病毒载体pGC-FU连接,构建重组质粒pGC-FU-hCBFα1/RUNX2,并进行酶切及测序鉴定.鉴定正确的克隆转染293T细胞,经荧光显微镜观察和Western Blot检测hCBFα 1/RUNX2基因在293T细胞内的瞬时表达.再利用脂质体转染法将pGC-FU-hCBFα1/RUNX2、pHelper1.0和pHelper2.0三质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,并通过实时荧光定量PCR检测病毒滴度.结果 重组质粒经测序证实,插入片段与人CBFα 1/RUNX2基因序列完全一致.荧光显微镜观察以及Western Blot印迹均证实pGC-FU-hCBFα1/RUNX2中携有正确的hCBFα1/RUNX2基因,并能在293T细胞中瞬时表达.包装慢病毒后实时荧光定量PCR检测病毒滴度为(2.00×108)TU/mL.结论 成功构建了携带hCBFα1/RUNX2基因的重组慢病毒载体,为进一步研究其在牙周组织再生中的生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹金芳	温州医学院附属口腔医院口腔内科	18	82	5.0	8.0
2	邓辉	温州医学院附属口腔医院口腔内科	26	93	6.0	7.0
3	李伟宏	温州医学院附属口腔医院口腔内科	7	23	3.0	4.0
4	王惠宁	温州医学院附属口腔医院口腔内科	23	73	5.0	7.0