登革2型病毒NGC株E基因部分序列原核蛋白表达

• 作者: 刘世国 左丽 王娇
• 来源期刊: 贵阳医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 登革热病毒 基因 E 基因顺序 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 581-584,588
• 页数: 5页
• 分类号: R373.33
• 字数: 2896字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2707.2008.06.004

摘要

目的:构建登革2型病毒NGC株E基因区1～476 bp的原核表达载体并进行原核表达.方法:将登革2型病毒NGC株E基因区部分序列克隆入原核表达载体pET28a(+),命名为pET28a(+)-En;经酶切、PCR及测序鉴定后转化BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE、Western印迹鉴定表达蛋白;对表达蛋白进行纯化,并滴定对C6/36细胞的TCID50.结果:(1)成功构建了pET28a(+)-En原核表达重组质粒,SDS-PAGE分析表明,E基因区部分序列获得高效表达,相对分子量约为23 kD,表达量约占菌体总蛋白的29%;Western印迹表明该目的蛋白可与登革2型病毒鼠单克隆抗体结合;(2)用Ni柱亲和层析法纯化原核表达蛋白,纯度达90%;(3)DEN-2 NGC株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞的TCID50为10-4.88/0.1 ml.结论:pET28a(+)-En可在BL21(DE3)菌株中高效表达,DEN-2 NGC株E基因部分序列原核表达蛋白对C6/36细胞有一定的细胞毒作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	左丽	贵阳医学院免疫学教研室	98	378	9.0	15.0
2	刘世国	华中理工大学医学院	1	1	1.0	1.0
3	王娇	贵州省中心血站	2	1	1.0	1.0