IL-8基因真核表达载体的构建及其在OVCAR-3卵巢癌细胞中的表达

• 作者: 李万胜 程建新 胡洁 赵娟 魏林
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素8 卵巢肿瘤 pcDNA3.1(+)真核表达载体 肿瘤生长增殖
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 144-147
• 页数: 4页
• 分类号: R737.31
• 字数: 3480字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2008.02.011

摘要

目的:构建白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)基因真核表达载体,瞬时转染OVCAR-3卵巢癌细胞,为进一步探讨其与肿瘤发生发展关系奠定基础.方法:采用RT-PCR法自健康志愿者外周血单个核细胞扩增IL-8基因,构建pcDNA3.1(+)/IL-8重组质粒;脂质体介导将外源基因转入OVCAR-3卵巢癌细胞,半定量RT-PCR、Western印迹及ELISA法鉴定其mRNA及蛋白瞬时表达后,MTT法检测细胞转染前后生长增殖特性的改变,FCM检测细胞周期的变化.结果:重组质粒双酶切电泳结果显示,相应位置(300 bp,5 400 bp)可见2条清晰特异的DNA条带;DNA测序结果进一步显示,重组质粒中插入的基因片段全长 300 bp,编码序列与GenBank报道的基因序列相符,阅读框保持不变;RT-PCR、Western 印迹检测及ELISA检测结果显示,转染后OVCAR-3细胞IL-8 mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);MTT检测结果显示,IL-8转染细胞组转染3 d后的光密度值(D值)显著高于未转染细胞组(P<0.05);FCM分析结果显示,OVCAR-3细胞转染IL-8基因后进入S期的细胞比例显著增高,增殖指数也相应上升,与未转染及空质粒转染组细胞相比,差异显著(P<0.05).结论:IL-8基因真核表达载体成功构建并瞬时转染OVCAR-3卵巢癌细胞;IL-8可以自分泌方式促进卵巢癌OVCAR-3细胞生长增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡洁	河北医科大学基础医学院免疫教研室	50	191	8.0	10.0
2	程建新	河北医科大学第四医院妇产科	78	377	9.0	15.0
3	赵娟	河北医科大学第四医院妇产科	52	263	9.0	13.0
4	李万胜	河北医科大学第四医院妇产科	8	54	4.0	7.0
5	魏林	河北医科大学基础医学院免疫教研室	46	214	8.0	12.0