人类免疫缺陷病毒1型病毒复制负调控因子编码基因的克隆及在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中的表达

• 作者: 冯宁翰 华立新 卢春 吕志刚 曹戌 李久明 秦娣
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类免疫缺陷病毒1型 病毒复制负调控因子 真核表达
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 434-438,444
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 3273字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2008.04.007

摘要

目的:分离克隆人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)编码的病毒复制负调控因子(Nagative factor,Nef)基因,并将其导入BCBL-I细胞和NIH/3T3细胞中进行表达.方法:根据GenBank登记的Nef基因核苷酸序列设计PCR引物,在其5'端分别引入EcoR I和Sal I酶切位点;以含有Nef基因的pCINL质粒为模板,扩增Nef基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pCI-neo中.为了便于蛋白检测,在下游引物5'端引入Flag序列,构建重组真核表达质粒.重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后分别瞬时转染BCBL-I细胞和NIH/3T3细胞,用RT-PCR、Western blot分别从核酸和蛋白水平检测Nef基因的表达情况.结果:成功构建了含Nef基因的重组真核表达质粒,核酸序列分析显示,克隆的Nef基因序列全长651 bp,与GenBank中登记的Nef基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Western blot都在Nef预期位置检测到特异性条带.结论:HIV-1 Nef基因在BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中获得了正确表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	华立新	南京医科大学第一附属医院泌尿外科	123	645	13.0	16.0
2	卢春	南京医科大学微生物学与免疫学系	92	236	7.0	9.0
3	冯宁翰	南京医科大学第一附属医院泌尿外科	33	128	7.0	10.0
4	秦娣	南京医科大学微生物学与免疫学系	22	40	4.0	4.0
5	李久明	南京医科大学第一附属医院泌尿外科	9	53	3.0	7.0
6	吕志刚	南京医科大学微生物学与免疫学系	6	9	2.0	2.0
7	曹戌	南京医科大学第一附属医院泌尿外科	2	6	2.0	2.0