携带LMO3基因逆转录病毒载体的构建及其在NIH/3 T3细胞中的表达

• 作者: 万东君 付学锋 刘晓花 张新宇 罗芸
• 来源期刊: 解放军医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单纯LIM蛋白3 NIH/3T3细胞 逆转录病毒科感染 pLXSN
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 22-26
• 页数: 5页
• 分类号: R512.99
• 字数: 4161字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-140X.2014.05.006

摘要

目的：构建单纯LIM蛋白3(LMO3)的逆转录表达载体,并观察其在 NIH/3T3细胞中的表达情况。方法重组载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定后,脂质体法转染到pA317包装细胞,G418筛选稳定的病毒产生细胞株。重组逆转录病毒体外感染NIH/3T3,并对其进行病毒滴度检测,NIH/3T3细胞分为3组：以pLXSN-LMO3转染为实验组,以pLXSN转染为阴性对照组,正常细胞为空白对照组。采用免疫荧光组化染色和蛋白印迹( Western blot)法鉴定NIH/3T3细胞中LMO3的表达。结果重组逆转录病毒载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定构建正确,其病毒滴度平均可达4.04×106 cfu/ml,各组NIH/3T3细胞免疫荧光组化染色及Western blot检测均有LMO3蛋白表达,其中实验组高表达LMO3,与阴性对照组、空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了携带LMO3基因逆转录病毒载体,并能在NIH/3T3细胞中高表达LMO3蛋白,为下一步开展基因治疗奠定了基础。