卡波济肉瘤相关疱疹病毒编码IL-6基因的分离克隆及在NIH3T3细胞中的表达研究

• 作者: 卢春 姚水洪 曾怡 秦娣 程林 陈秀英
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 病毒编码IL-6 flag序列 真核表达
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 881-886
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 3778字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2006.10.001

摘要

目的:分离克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码IL-6基因(vIL-6),并导入NIH3T3细胞中进行真核表达.方法:根据KSHV编码IL-6基因核苷酸序列设计一对引物,在引物的5'端分别引入BamH Ⅰ、HindⅢ酶切位点,以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增vIL-6基因,PCR产物经双酶切克隆进真核载体pcDNA3.1(+).进一步在原有的下游引物5'端加上一段flag序列,以经过序列测定正确的重组质粒为模板,PCR扩增vIL-6-flag融合基因,构建含vIL-6-flag的重组质粒.将该质粒转染NIH3T3细胞,经G418筛选获细胞抗性克隆.最后用抗flag M2单克隆抗体进行Western blot检测vIL-6在NIH3T3细胞中的表达.结果:获得vIL-6-flag融合基因,全长671 bp,其中vIL-6基因核苷酸序列与GenBank中所登记的KSHV vIL-6基因呈现100%同源性.Western blot结果显示,在约25 ku位置有目的条带,与预期的重组vIL-6-flag融合蛋白大小一致.结论:KSHV vIL-6编码基因在NIH3T3细胞中初步获得表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢春	南京医科大学微生物学与免疫学系	92	236	7.0	9.0
2	曾怡	南京医科大学微生物学与免疫学系	27	93	5.0	6.0
3	陈秀英	南京医科大学微生物学与免疫学系	23	75	5.0	8.0
4	程林	南京医科大学微生物学与免疫学系	4	13	2.0	3.0
5	姚水洪	南京医科大学微生物学与免疫学系	2	12	2.0	2.0
6	秦娣	南京医科大学微生物学与免疫学系	22	40	4.0	4.0