人微管不稳定蛋白基因真核表达载体的构建与表达及对食管癌细胞的作用

• 作者: 樊青霞 王峰 王瑞林 王留兴 赵培荣
• 来源期刊: 中华肿瘤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人stathmin基因 真核表达载体 EC9706细胞
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 179-183
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 5187字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-3766.2008.03.005

摘要

目的 构建人微管不稳定蛋白基因(stathmin)真核表达载体,研究其对食管癌细胞EC9706的作用.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增stathmin cDNA,克隆至pMDl8-T载体并酶切鉴定后,亚克隆至pEGFP-C2真核表达载体.将测序鉴定正确的重组载体和空载体经脂质体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.通过荧光显微镜观察转染细胞荧光蛋白的表达,采用Western blot检测转染细胞中增强型荧光蛋白(EGFP)和stathmin融合蛋白的表达.选取稳定转染的细胞株,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪分析细胞的增殖状态,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性.结果 RT-PCR扩增获得450 bp的cDNA编码序列;克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定后获反向插入质粒;亚克隆至pEGFP-C2载体后,经酶切与测序鉴定,重组载体pEGFP-stathmin构建成功.重组载体和空载体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.通过荧光显微镜观察到,转染细胞中呈现绿色荧光;经Western blot证实,重组载体表达46 000的融合蛋白.与空载体转染细胞相比,转染重组载体的EC9706细胞形态变大,增殖速度减慢,细胞分裂阻滞于G2/M期,细胞克隆形成数减少,裸鼠体内成瘤性降低(P＜0.05).结论 构建的真核表达载体pEGFP-stathmin在食管癌EC9706细胞中能够稳定表达,并抑制肿瘤细胞的增殖和成瘤性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	樊青霞	郑州大学第一附属医院肿瘤内科	283	1373	16.0	22.0
2	王瑞林	郑州大学第一附属医院肿瘤内科	104	533	11.0	16.0
3	王留兴	郑州大学第一附属医院肿瘤内科	158	792	14.0	19.0
4	王峰	郑州大学第一附属医院肿瘤内科	120	477	11.0	17.0
5	赵培荣	郑州大学第一附属医院肿瘤内科	50	299	8.0	14.0