重组葡萄球菌肠毒素B蛋白表达、纯化及生物活性的实验研究

• 作者: 严杰 徐水凌 毛亚飞 漆秋兰
• 来源期刊: 中国药学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄球菌肠毒素B 重组蛋白 细胞毒性 淋巴细胞增殖 抑制肿瘤细胞
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 568-572
• 页数: 5页
• 分类号: R915
• 字数: 4269字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-2494.2008.08.003

摘要

目的 建立重组葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)表达、纯化方法,了解rSEB细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用.方法 采用IPTG(1.0 mmol·L-1)诱导SEB原核表达系统pET32α-SEB-E.coliBL21DE3表达rSEB,10%SDS-PAGE检测其产量,Ni-NTA亲和色谱法纯化rSEB.采用Veto细胞测定rSEB的细胞毒性作用,并计算TCIC50值.通过MTT法分别检测不同浓度rSEB体外促淋巴细胞增殖作用,以及对肿瘤细胞株HepG2、HeLa的生长抑制作用.结果 所构建的SEB原核表达系统中,rSEB表达量约为细菌总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在.纯化的rSEB对Vem细胞的TCIC50为3.02μg.5.0～μ20.0 mg·L-1的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P<0.05).5.0～20.0 mg·L-1 rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P<0.05).结论 建立了SEB高效表达、纯化方法,获得rSEB蛋白.所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为后续进一步分析SEB分子中相关活性位点及其减毒SEB突变体的筛选奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
2	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
3	徐水凌	嘉兴学院医学院	54	224	8.0	12.0
4	漆秋兰	嘉兴学院医学院	7	16	2.0	4.0