金黄色葡萄球菌M型肠毒素原核表达、纯化、鉴定及溶液构象分析

• 作者: 刘骥 周玉珊 唐俊妮 孙思雨 杨帆 田万帆 赵燕英 龙虎
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌M型肠毒素 原核表达 纯化 质谱 圆二色谱 荧光发射谱 热稳定性
• 年，卷（期）: 2017,（24）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 40-46
• 页数: 7页
• 分类号: TS201.1
• 字数: 5854字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201724007

摘要

葡萄球菌肠毒素M是由金黄色葡萄球菌νSa基因岛编码的分泌型超抗原.本研究将截去N端信号肽的金黄色葡萄球菌M型肠毒素(staphylococcal enterotoxin M,SEM)蛋白编码基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a(+)-ΔNspsem;随后转化感受态E.coli Rosetta(DE3)并探讨融合蛋白最佳表达条件;利用Ni2+-Sepharose 4 Fast Flow亲合层析纯化出His-ΔNspSEM融合蛋白;经质谱鉴定,纯化的融合蛋白对SEM的氨基酸覆盖率达96.3%;凝血酶切除6×His标签肽后,圆二色谱分析表明ΔNspSEM重组蛋白富含β-折叠(35%)和β-转角(21%)以及较少α-螺旋(16%)等二级结构;荧光发射谱揭示ΔNspSEM在278nm和295nm波长处激发时具有相同的Trp发射峰(341nm);十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析表明ΔNspSEM重组蛋白表现出较高的热稳定性.研究结果表明重组蛋白SEM表达成功,纯化的ΔNspSEM重组蛋白溶液构象紧密并具有接近天然状态的结构,这为深入研究SEM蛋白的结构与功能提供理论支持.