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摘要:
目的:以Ⅰ型流感病毒RNA为模板扩增NP全基因cDNA,并在大肠杆菌中进行表达与鉴定.方法:提取流感病毒RNA,以RT-PCR法扩增编码NP基因cDNA.将扩增所得NP基因克隆于pMD18-T载体,然后定向亚克隆NP基因于原核表达载体pET-28a的多克隆位点中,经酶切鉴定后,将含有NP基因的重组质粒命名为pET-NP.用pET-NP转化受体菌BL21,在大肠杆菌BL21中表达,用诱导剂IPTG以不同浓度进行诱导,并在不同诱导时间收集样品,用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物.结果:经SDS-PAGE电泳分析证实NP基因获得了表达,并在终浓度为1 mM的IPTG诱导下,6 h其表达量达到高峰,经Western-blot分析证实表达的重组核蛋白具有免疫反应活性,大小约为60 kd.结论:流感病毒核蛋白基因编码区基因获得成功克隆和构建,为流感病毒诊断试剂及单抗的研制工作提供了基础材料.
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文献信息
篇名 Ⅰ型流感病毒核蛋白(NP)基因在大肠杆菌中的表达与鉴定
来源期刊 中国医学装备 学科 医学
关键词 流感病毒 核蛋白 原核表达 大肠杆菌
年,卷(期) 2008,(8) 所属期刊栏目 临床应用
研究方向 页码范围 36-40
页数 5页 分类号 R516
字数 4032字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1672-8270.2008.08.014
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 尤敏 23 109 5.0 10.0
2 邹玉红 4 8 2.0 2.0
3 崔尚金 8 26 3.0 5.0
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原核表达
大肠杆菌
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中国医学装备
月刊
1672-8270
11-5211/TH
大16开
北京市西城区南纬路27号
80-373
2004
chi
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