hTERT启动子调控的融合自杀基因CD:UPRT载体的构建及其应用

• 作者: 何青春 刘霆 张桂英 曹伟军
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: 人端粒酶逆转录酶启动子 胞嘧啶脱氨酶 尿嘧啶磷酸核糖转移酶 胃癌 靶向基因治疗
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 402-405
• 页数: 4页
• 分类号: R730.54
• 字数: 3604字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建hTERT启动子调控的融合自杀基因CD:UPRT表达载体,研究其对人胃癌细胞SGC7901的体外靶向性杀伤作用.方法 PCR扩增hTERT核心启动子片段,克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic,检测hTERT启动子在人胃癌细胞SGC7901和人成纤维细胞HLF中的转录活性.构建hTERT启动子调控的CD:UPRT基因表达载体hTERT-CD:UPRT,将其和CMV启动子调控的CD:UPRT基因表达载体pcDNA 3.1-CD:UPI汀用脂质体转染法分别转染入SGC7901和HLF细胞,筛选稳定表达细胞系,用RT-PCR和Western blot方法检测CD基因的表达,用MTT法检测5-FC对转染细胞的杀伤作用.结果 成功克隆hTERT核心启动子;荧光素酶活性检测显示,hTERT启动子在SGC7901细胞中的转录活性为阳性对照的(21.50±2.15)%,而在HLF细胞中仅有背景活性.成功构建hTERT启动子调控的CD:UPRT基因表达裁体,转染pcDNA 3.1-CD:UPRT的SGC7901和HLF细胞以及转粢hTERT-CD:UPRT的SGC7901细胞在mRNA和蛋白质水平均可检测到CD基因的表达,且对5-FC敏感;而转染hTERT-CD:UPRT的HLF细胞未检测到CD基因的表达,对5-FC不敏感.结论 构建的hTERT启动子调控的融合自杀基因系统CD:UPRT/5-FC能在体外靶向性杀伤SGC7901细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张桂英	中南大学湘雅医院消化内科	215	1229	17.0	23.0
2	刘霆	中南大学湘雅医院消化内科	34	212	7.0	14.0
3	何青春	中南大学湘雅医院消化内科	9	42	4.0	6.0
4	曹伟军	中南大学湘雅医院消化内科	4	10	2.0	3.0