结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗的构建、鉴定和表达及其保护力

• 作者: 曾莉蓉 李文桂 谢婷
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 重组Bb-ESAT-6疫苗 构建 鉴定 表达 保护力
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 555-561
• 页数: 7页
• 分类号: R521
• 字数: 7165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.06.017

摘要

目的 构建和鉴定结核分枝杆菌(MTB)重组双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum, Bb)-ESAT-6疫苗,研究该疫苗对鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.方法 以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到ESAT-6抗原编码基因;将该基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-ESAT-6;用电穿孔法将该质粒导入Bb及BL21(DE3),构建结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗.用IPTG诱导重组BL21(DE3)菌表达ESAT-6/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定.65只BALB/c雌性小鼠,随机分为5组:A组(SC)、B组(IM)、C组(IN)、D组(Bb)、E组(PBS).分别于免疫后8周用5×105CFU MTB H37Ra减毒株悬浮于10μL PBS中进行鼻腔粘膜接种感染.攻击感染后6w剖杀各组小鼠8只,计数肝、肺组织荷菌量,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE, MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖.结果 PCR成功扩增出288bp的ESAT-6基因;双酶切证实ESAT6基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-ESAT-6疫苗构建成功.免疫印迹分析发现重组质粒pGEX-ESAT-6的表达产物在相对分子量(35kDa)处有明显的蛋白表达条带,表达效率为20%,且能被活动性结核病人血清特异识别.鼻腔内接种组的肝、肺组织荷菌量明显低于其他免疫组.疫苗接种组IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b明显升高,IgG3和IgE无明显变化;疫苗接种组的脾淋巴细胞明显增殖.结论 成功构建了结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗,重组Bb-ESAT-6疫苗在抗结核分枝杆菌感染过程中具有一定免疫保护作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李文桂	重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫研究所	313	1230	16.0	20.0
2	谢婷	重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫研究所	6	17	2.0	4.0
3	曾莉蓉	重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫研究所	5	21	3.0	4.0