重组Akt腺病毒的构建及其在肝硬化大鼠肝脏中的表达

• 作者: 刘浔阳 罗成群 邓刚 郭立武 黄飞舟
• 来源期刊: 中国普通外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝硬化 重组腺病毒载体 Akt 转染 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 687-691
• 页数: 5页
• 分类号: R657.3
• 字数: 3680字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6947.2008.07.014

摘要

目的 探讨持续活化Akt且带有HA标签(myr-HA-Akt)基因的重组腺病毒在肝硬化大鼠肝脏中的表达特性.方法 酶切正向插入目的 基因的真核表达载体peDNA3.1-myr.HA-Akt,获得myr.HA-Akt cDNA后,将其定向克隆到穿梭质粒pDC316中,然后将重组质粒与病毒骨架质粒pBHGloxAE1,3Cre共转染293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt,并进行扩增、纯化.通过观察腺病毒感染293细胞后是否出现细胞病变效应;PCR和基因测序方法对所构建病毒进行鉴定,并采用TCID50法检测病毒滴度.自尾静脉注射重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt感染肝硬化模型大鼠.免疫印迹法检测大鼠肝组织内Akt和p-Akt蛋白的表达.结果 感染的293细胞出现明显的细胞病变效应,PCR产物电泳证实重组腺病毒的存在,基因测序证实myr-HA-Akt的cDNA正确插入穿梭质粒且与pBHGloxAE1,3Cre正确同源重组;病毒滴度为5.5×1011vp/mL.从蛋白水平证实感染病毒的肝硬化模型大鼠有外源性Akt基因的表达.结论 构建的重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt能有效地感染肝硬化模型大鼠,并可在模型大鼠中正确转录和翻译,为进一步研究腺病毒介导的Akt基因对肝硬化的治疗奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄飞舟	中南大学湘雅三医院普外一科	78	425	10.0	16.0
2	刘浔阳	中南大学湘雅三医院普外一科	78	554	10.0	19.0
3	罗成群	中南大学湘雅三医院烧伤外科	101	556	11.0	18.0
4	邓刚	中南大学湘雅三医院普外一科	7	16	2.0	3.0