增殖诱导配体基因短发夹RNA慢病毒表达载体的构建

• 作者: SHAO Jian-guo WANG Feng 毛振彪 陈琳
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒属 膜蛋白质类 肿瘤坏死因子类 RNA,小分子干扰 遗传载体
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 919-923
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3743字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1009-9158.2008.08.022

摘要

目的 构建针对人的增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,并在感染293T细胞后检测病毒滴度及适合的感染复数(multiplicity of infection,MOI)值.方法 以人APRIL基因为靶点,筛选出3条shRNA靶序列:shAPRIL1210、shAPRIL1754、shAPRIL1604;各自合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA后分别与经酶切的pGEL-GFP载体连接,构建3个慢病毒表达载体LV-shAPRIL1210、LV-shAPRIL1754、LV-shAPRIL1604;将连接产物分别转化到DH5α感受态细胞,经PCR及DNA测序鉴定.再用LV-shAPRIL与包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白的表达水平确定病毒滴度及适合的MOI值.结果 PCR和测序结果与构建的3个慢病毒载体LV-shAPRIL1210、LV-shAPRIL1754、LV-shAPRIL1604的预期结果一致,经包装产生的慢病毒滴度分别为5×107、6×107、4×107转导单位(TU)/ml;适合高效感染的MOI值为5.结论 成功构建人APRIL基因3个慢病毒表达载体LV-shAPRIL,为后继的在相关靶细胞中诱导特异性的APRIL基因沉默奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈琳	南通大学附属南通第三人民医院检验科	30	84	6.0	8.0
2	SHAO Jian-guo	南通大学附属医院消化内科	1	1	1.0	1.0