猪囊尾蚴cDNA文库的筛选与重组蛋白的初步鉴定

• 作者: 汪学龙 沈继龙 郑胜生
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪囊尾蚴 免疫学筛选 克隆 表达 鉴定
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 644-646,650
• 页数: 4页
• 分类号: R383.3
• 字数: 2599字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.07.012

摘要

目的 从猪囊尾蚴cDNA文库中免疫学筛选阳性蛋白的编码基因.以期获得囊尾蚴病新的免疫学诊断候选分子.方法 免疫学筛选cDNA文库,用PCR法扩增出猪囊尾蚴候选蛋白基因编码序列,T载体连接,鉴定后将其亚克隆入pET28a(+)载体中.经酶切、测序证实正确后.转化入大肠杆菌BL21并用IPTG对该重组菌诱导表达.SDS-PAGE和Westernblot方法观察表达结果.结果 通过cDNA文库免疫筛选、测序和EXPASY软件分析,其一个684bp ORF DNA序列为新基因(命名为Tsl).录入号为EU009656;将Tsl基因克隆入pET28a(+)载体中诱导表达,可得到一分子量约28.0kDa融合蛋白,并能被囊尾蚴病人血清识别.结论 本试验成功筛选、克隆出一个新囊尾蚴编码基因.并在原核细胞中表达,为进一步验证其免疫诊断价值奠定了基础.