可诱导表达mIL-12单链融合蛋白的腺病毒载体的构建

• 作者: SU Chang-qing XUE Xu-chao 方国恩 钱其军 陈坚
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素12 腺病毒科 遗传载体 基因调控 RU486
• 年，卷（期）: 2008,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2738-2741
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3940字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2008.16.004

摘要

目的:构建带mIL-12单链融合蛋白基因并可经RU486诱导表达的重组腺病毒载体,以期用于体内的基因治疗研究.方法:构建穿梭质粒pDC-RUmIL-12,使mIL-12单链融合蛋白基因和启动子在RU486诱导表达系统调控之下,酶切、测序鉴定正确后,将其与Admax腺病毒包装系统的辅助质粒共转染HEK293细胞后,构建出可调控的重组腺病毒载体,用mIL-12引物对病毒进行鉴定,氯化铯密度梯度离心纯化病毒,最终稀释法测定其滴度,并在结肠癌SW620细胞中Western Blot和ELISA法检测其基因调控效果.结果:经PCR鉴定证实可调控腺病毒载体Ad-RUmlL-12构建正确,病毒滴度达到4.62×1010pfu/mL.当给予诱导剂RU486后,腺病毒载体可以诱导表达mIL-12单链融合蛋白,表达量随着诱导剂浓度而增加,而没有RU486时,几乎没有mIL-12蛋白的表达,结论:成功构建了重组腺病毒 Ad-RUmIL-12,可以通过RU486诱导mIL-12单链融合蛋白的表达,为下一步体内基因治疗奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱其军	第二军医大学附属长海医院普通外科	106	367	10.0	15.0
2	陈坚	解放军第81医院肿瘤外科	26	112	6.0	10.0
3	XUE Xu-chao	第二军医大学附属长海医院普通外科	1	0	0.0	0.0
4	方国恩	东方肝胆医院病毒基因治疗实验室	1	0	0.0	0.0
5	SU Chang-qing	解放军第81医院肿瘤外科	1	0	0.0	0.0