真核表达载体pCMV-(Kozak)TFPI在搭桥模型移植静脉中的表达

• 作者: 厉泉 孙图成 张凯伦 徐鹏 祖育昆 蒋雄刚 郭超 龚永生
• 来源期刊: 中国老年学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 冠状动脉旁路移植术 组织因子途径抑制因子 移植静脉 转染
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 628-630
• 页数: 3页
• 分类号: R654.2|R541.4
• 字数: 2798字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9202.2008.07.002

摘要

目的 构建真核表达载体Pcmv-(Kozak)TFPI并检测其在移植静脉中的表达,为冠状动脉旁路移植术中转染大隐静脉内皮细胞抗凝治疗的临床试验奠定理论应用基础.方法 用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法提取人组织因子途径抑制因子(TFPI)基因,并引入Kozak序列,将(Kozak)TFPI亚克隆入Pcmv质粒中.在阳离子脂质体介导下,转染颈总动脉搭桥模型移植静脉内皮细胞.RT-PCR、蛋白印迹法(Western印迹)和免疫组化法检测移植静脉中外源TFPI基因Mrna和蛋白的表达.结果 (Kozak)TFPI成功克隆入Pcmv中.RT-PCR、Western印迹和免疫组化检测到移植静脉中外源TFPI基因Mrna和蛋白的表达.结论 Pcmv-(Kozak)TFPI真核表达载体构建成功,移植静脉中检测到其蛋白的表达.