全长型人Smac基因真核表达载体构建及表达

• 作者: 刘晓梅 刘颖 孙志伟 李艳博 杜海英 郭彩霞 龚守良
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 医学
• 关键词: Smac 克隆 基因转染
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1328-1330
• 页数: 3页
• 分类号: R730.54
• 字数: 2399字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-0580.2008.11.032

摘要

目的 构建全长型(full length,FL)人Smac基因(hSmac)真核表达载体pcDNA3.1+-FL hSmac,并在肝癌细胞中表达.方法 应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人宫颈癌细胞株Hela中扩增到Smac CDs基因片段,构建重组真核表达载体peDNA3.1+-FL hSmae.PCR、酶切鉴定重组质粒正确后,通过脂质体介导将其和作为阴性对照的空载体pcDNA3.1+分别转染人肝癌细胞株(SMMC-7721).同时转染含EGFP的质粒pcDNA3.1+-EGFP.利用荧光显微镜和流式细胞术检测转染效率.采用RT-PCR、western blot法检测外源基因Smac的表达.结果 PCR扩增片段与预期片段大小相符,插入片段测序结果与GenBank公布的一致,表明人Smac基因克隆成功.且鉴定证实真核表达载体pcDNA3.1+-FL hSmac构建成功.流式细胞术检测到转染效率高达48%,荧光显微镜下也可见非常明亮的绿色荧光.无论是在mRNA水平还是蛋白水平上,转染后的细胞中外源基因Smac表达均明显增加.结论 成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1+-FL hSmac,并在肝癌细胞中明显表达,为研究Smac基因在细胞凋亡过程中的调控作用.以及探讨以Smac基因为基础的肿瘤基因治疗策略提代基础依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭彩霞	吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室	79	425	11.0	16.0
2	刘颖	吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室	158	1059	18.0	25.0
3	孙志伟	吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室	42	312	11.0	15.0
4	刘晓梅	吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室	60	321	11.0	13.0
5	杜海英	吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室	18	71	6.0	7.0