人分化抑制因子Id-3基因在大肠埃希菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 吴东来 杨木蕾 林燕 白宇 穆丹梅 童铁钢 郑敏
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人分化抑制因子3(Id-3) 表达 纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2008,（23）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3446-3449
• 页数: 4页
• 分类号: R349.6
• 字数: 3713字
• 语种: 中文

摘要

目的 在大肠杆菌中表达人Id-3与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人ld-3的多克隆抗体.方法 从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增出Id-3的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-Id-3融合蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,Western-Blot检测重组抗原的免疫原性.通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-3融合蛋白,并以此为抗原制备多克隆抗体.结果 经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-3基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子量为39 000 GST-Id-3融合蛋白.ELISA和琼扩试验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-3融合蛋白发生特异性反应.结论 Id-3基因在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体,为检测Id-3及其在各种组织中的表达水平提供了一种检测途径,也为分析Id-3分子结构、抗原表住和生物学功能奠定了基础.