人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒的构建及鉴定

• 作者: 周继辉 曲彦隆 武志超 王春雷
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 生长分化因子5 质粒 组织工程 肌腱
• 年，卷（期）: 2008,（37）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7310-7313
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4305字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.37.021

摘要

背景:生长分化因子5是一种刺激肌腱、韧带塑型,增强愈合反应有效的生长因子,在活性组织工程肌腱构建中有重要作用.目的:构建人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒,为转染基质干细胞向肌腱诱导分化实验奠定基础.设计、时间及地点:细胞基因工程体外实验,于2007-08/12在哈尔滨医科大学遗传学教研室和分子生物学教研室完成.材料:根据Genbank(NM000557)中人生长分化因子5的序列化学合成一对引物,从人胎儿软骨组织提取总RNA.方法:通过反转录-聚合酶链反应得到人生长分化因子5完整成熟肽基因.将所得基因片段插入克隆载体pcDNA6.2并转化入JM109菌株,提取重组质粒,PCR鉴定、酶切鉴定并测序.主要观察指标:反转录-聚合酶链反应检测结果,PCR及SalⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定结果,重组质粒测序与Genbank中序列比较结果.结果:电泳显示,反转录-聚合酶链反应产物为一长约380 bp的带,阳性克隆质粒经PCR电泳及双酶切均出现约380 bp的片段.测序表明与Genbank中的序列完全相符.结论:成功构建出人重组pcDNA6.2/生长分化因子5质粒,为组织工程化肌腱过程中种子细胞的制备提供转染质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曲彦隆	哈尔滨医科大学附属第一医院骨科	36	154	7.0	10.0
2	王春雷	哈尔滨医科大学附属第一医院骨科	9	31	3.0	5.0
3	武志超	哈尔滨医科大学附属第一医院骨科	14	65	5.0	7.0
4	周继辉	哈尔滨医科大学附属第一医院骨科	7	32	3.0	5.0