腺病毒载体Ad-BDNF-EGFP的构建和在神经干细胞中的表达

• 作者: 吕立夏 崔银江 文会龙 李少华 李艳娜 汪洋 那曼丽 顾昕
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞 脑源性神经营养因子 增强绿色荧光蛋白 腺病毒载体 免疫组织化学
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 76-79,83
• 页数: 5页
• 分类号: R34|R-332
• 字数: 3769字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2008.01.021

摘要

目的 研究腺病毒载体Ad-BDNF-EGFP的构建及其在神经干细胞(NSCs)中的表达.方法 通过RT-PCR从大鼠海马中获得BDNF基因,通过基因克隆、HEK293包装,获得含增强绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体pAd-BDNF-EGFP,将其感染原代培养的神经干细胞,观察EGFP及BDNF 2种基因的表达,镜下测定转染率,并检测RT-PCR产物,证实BDNF的存在.转染后的神经干细胞经G418筛选,抗性细胞传代扩增后获得成功转染BDNF基因的NSCs克隆.结果 荧光显微镜下可见感染后的NSCs表达EGFP而发出绿色荧光;通过RT-PCR证明感染后的NSCs具有表达BDNF的能力;用ELISA鉴定细胞上清中分泌的BDNF,72 h的含量达到最高值,为12.78 ng/mL;证明通过构建病毒的感染可以使神经干细胞获得分泌BDNF的能力,且EGFP基因可作为神经干细胞移植研究中良好的示踪剂.结论 腺病毒病毒介导EGFP基因及BDNF基因在大鼠胚胎神经干细胞中成功表达,为应用以神经干细胞直接作为基因靶细胞,介导基因治疗中枢神经系统疾病奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕立夏	同济大学分子生物学教研室	86	277	9.0	13.0
2	汪洋	复旦大学医学院解剖组胚教研室	118	753	14.0	20.0
3	李少华		53	465	12.0	18.0
4	顾昕		22	307	10.0	17.0
5	李艳娜	同济大学分子生物学教研室	13	21	3.0	3.0
6	崔银江		3	24	2.0	3.0
7	文会龙		2	9	2.0	2.0
8	那曼丽		1	2	1.0	1.0