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重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建的实验研究
重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建的实验研究
作者:
刘茜
孟凡棣
李亚雄
李春城
贾政
邢正江
邹弘麟
韦杰
魏玲
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
Klotho基因
绿色荧光蛋白质类
腺病毒,人
杂合子
摘要:
目的 本研究旨在构建并制备增强型荧光蛋白(EGFP)基因和Klotho基因重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho,并将其感染HEK293细胞,为基因治疗提供研究基础.方法 设计含有NheⅠ与NotⅠ双酶切位点的引物,应用PCR方法扩增Klotho基因,将其连接到EGFP标记的pDC316-mCMV穿梭质粒上,构建重组穿梭质粒pDC316-mCMV-EGFP-Klotho,利用Polyfectin脂质体将骨架质粒和重组穿梭质粒共转染HEK293细胞进行同源重组,得到重组腺病毒Ad-EGFP-Klotho,并包装扩增,测定病毒颗粒数及滴度.采用PCR方法对重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho进行鉴定,并进行Klotho基因测序.结果 经PCR和NheⅠ、Not I双酶切鉴定,重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho中证实含有Klotho基因,测序结果和设计序列比对一致,重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建成功.滴度为2.0×1010Tu/mL,成功感染HEK293细胞,感染复数(MOI)=100,感染效率达91.75%,从Ad-EGFP-Klotho重组腺病毒载体中可以检测到3 045 bp的条带,表明目的基因已成功整合在重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho基因组中.结论 应用细胞内同源重组方法成功构建了含有EGFP和Klotho基因的重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho,制备获得高滴度的病毒,可高效感染HEK293细胞并表达目的蛋白.
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文献信息
篇名
重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建的实验研究
来源期刊
重庆医学
学科
生物学
关键词
Klotho基因
绿色荧光蛋白质类
腺病毒,人
杂合子
年,卷(期)
2019,(23)
所属期刊栏目
论著·基础研究
研究方向
页码范围
3970-3973
页数
4页
分类号
Q782
字数
3725字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1671-8348.2019.23.003
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杂合子
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
重庆医学
主办单位:
重庆市卫生信息中心
重庆市医学会
出版周期:
半月刊
ISSN:
1671-8348
CN:
50-1097/R
开本:
大16开
出版地:
重庆市渝北区宝环路420号
邮发代号:
78-27
创刊时间:
1972
语种:
chi
出版文献量(篇)
30732
总下载数(次)
32
总被引数(次)
193615
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